人內(nèi)脂素（Visfatin）ELISA檢測試劑盒使用手冊 

                                                                       產(chǎn)品貨號：XZK-3274

【摘要】：內(nèi)脂素(Visfatin)又稱煙酰胺磷酸核苷轉(zhuǎn)移酶（NAmPRT酶或NAMPT），以前被稱為前B細胞集落增強因子1（PBEF1）， 是一種酶，由NAMPT基因編碼。 該蛋白的細胞內(nèi)形式（iNAMPT）是煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）挽救途徑中的限速酶，該途徑將煙酰胺轉(zhuǎn)化為煙酰胺單核苷酸（NMN），負責哺乳動物中大部分NAD+的形成。 當ATP存在時，iNAMPT還可以催化從焦磷酸磷酰（PRPP）合成NMN。雖然PBEF最初的細胞因子功能至今沒有得到證實，但后來其他人報告或建議該蛋白具有類似細胞因子的功能。 特別是Nampt/PBEF最近被重新確認為一種 "新的內(nèi)臟脂肪衍生激素"，名為visfatin。據(jù)報道，visfatin在人類和小鼠的內(nèi)臟脂肪中都很豐富，在肥胖的發(fā)展過程中其血漿水平增加。

【產(chǎn)品用途】：本試劑盒僅供科研使用，定量檢測細胞液、體液、組織、血清、血漿等標本中Visfatin含量。凡訂購我司任意一款試劑盒均享受免費代測服務，歡迎咨詢、訂購！

實驗前準備要點：

1. 準備各種實驗儀器及材料（如：37℃恒溫箱，450nm酶標儀、高速離心機、高精度加樣器及槍頭等等）

2. 按照生物實驗室安全防護條例，穿著實驗服并佩戴乳膠手套做好防護工作

3. 使用前應將試劑盒內(nèi)各試劑取出，平衡至室溫（至少30分鐘）

4. 嚴格按照說明書的操作方法進行操作。說明書以英文說明書為準。

人內(nèi)脂素（Visfatin）ELISA檢測試劑盒組成：（檢測范圍請以新版說明書為準）

注意：使用前請檢查試劑盒中試劑的標簽和數(shù)量與表格是否一致。 

操作步驟：

【平衡試劑盒至常溫】：取出實驗過程中所需板條，剩余半條用自封袋密封放回4攝氏度。

【加樣】：設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL。在樣本孔先加樣本10μl再加稀釋液40μl，（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）
【加酶】：標準品孔和樣本孔總每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL空白孔除外。
【溫育】：用封板膜封住反應孔，37℃恒溫箱溫育60分鐘。
【配液】：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。
【洗滌】：小心揭掉封板膜，棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置60秒后甩去洗滌液，吸水紙上拍干。如此重復5次（也可用洗板機洗板）。

【顯色】：每孔先加入底物溶液A 50μl，再加入底物溶液B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光孵育15分鐘。
【終止】：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
【測定】：以空白孔調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

【說明】：電子版說明書僅供參考，實際操作請按照隨產(chǎn)品發(fā)送的印刷版說明書。中英文說明書可能會有不一致的地方請以英文說明書為準。

安全性：

1． 避免人體直接接觸顯色劑A、B和終止液。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。

2． 實驗中不要進食、抽煙或使用化妝品。

3． 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

保存條件及有效期：

1.試劑盒保存：2-8℃

2.有效期：6個月